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慢速響應(yīng)型探針（Slow response probes）
Release Time：2022-02-10慢速響應(yīng)型探針
慢速響應(yīng)型探針（Slow-Response Probes ）對膜電位的反應(yīng)主要通過改變探針分子在膜表面的富集與分布，因此 慢速響應(yīng)型探針 對膜電位的反應(yīng)較慢，往往需至少數(shù)十毫秒。但是 慢速響應(yīng)型探針 對膜電壓的反應(yīng)較靈敏，熒光變程可以達到100%每100 mV。由于對電壓的靈敏度高，慢響應(yīng)探針可以檢測到未極化的普通細胞膜表面的電壓變化，比如離子通道活動，藥物受體結(jié)合等引起的細微膜電壓改變。根據(jù)探針的化學結(jié)構(gòu)，慢響應(yīng)探針可分為碳鏈花青類 （Carbocyanine）探和羅丹明類（rhodamines）探針和oxonol類探針。
羰花青 (Carbocyanine)
DiI、DiS 和 DiO 衍生物，羰花青類 (Carbocyanine)具有短烷基尾（<7 個碳原子）的 Indo- (DiI)、thia- (DiS) 和 oxa- (DiO) 碳花青，是最早開發(fā)出來的膜電壓探針。由于碳鏈和疏水性，這類探針富集在膜表面甚至嵌入到膜當中，對膜電壓變化的反應(yīng)程度主要取結(jié)于探針染料的濃度和探針化學結(jié)構(gòu)。碳鏈花青類探針可同時探測細胞質(zhì)膜和線粒體膜的電壓，但是往往對線粒體膜的電壓變化更靈敏。因此，如果需要探測線粒體的膜電壓，務(wù)必只使用極低的濃度（<100 nM），來降低細胞質(zhì)膜和其他細胞器膜的干擾。
DiOC6(3) 和 DiOC5(3) 是用于膜電位測量的最廣泛使用的羰花青染料。
| 光色 | 探針名稱 | 同義名稱 | 激發(fā)波長/發(fā)射波長(nm) | 產(chǎn)品貨號 |
|---|---|---|---|---|
| DiOC2(3) | MitoProbe DiOC2(3) | 482/497 | ||
| DiOC5(3) | 482/504 | HCT012267 | ||
| DiOC6(3) | 482/504 | |||
| DiSC3(5) | 651/675 | |||
| DiIC1(5) | MitoProbe DiIC1(5) | 640/657 |
羅丹明 123、TMRM 和 TMRE
羅丹明 123 被廣泛用作線粒體的結(jié)構(gòu)標記物和線粒體活性的指示物。通過將細胞外 K+ 濃度設(shè)置為接近細胞內(nèi)值 (~137 mM) 來獲得線粒體的高選擇性、電位依賴性染色，從而使質(zhì)膜去極化。
TMRM 和 TMRE ，四甲基羅丹明的甲酯和乙酯與羅丹明 123 密切相關(guān)。它們主要是線粒體膜電位傳感器。這些陽離子染料在線粒體中的積累會導(dǎo)致熒光減弱，因為自淬火。 TMRM 和 TMRE 比羅丹明 123 更快地穿過質(zhì)膜，并且它們的強熒光允許使用低濃度的探針，從而避免聚集。因為它們的熒光對環(huán)境相對不敏感，TMRM 和 TMRE 的空間分辨熒光呈現(xiàn)出它們跨膜分布的無偏分布，可以通過 Nernst 方程與質(zhì)膜電位直接相關(guān)。影響活細胞中線粒體膜電位的藥物的通量篩選測定。
Oxonols
Oxonol V and Oxonol VI
通過從細胞外溶液中的能斯特平衡依賴性攝取而積聚在去極化細胞的細胞質(zhì)中。它們在水和膜之間的電壓依賴性分配通常通過吸收而不是熒光來測量。
此外，oxonol VI 比 oxonol V 對電位變化的反應(yīng)更快，因此被認為是測量快速電位變化的更好探針。
